HEPES和HEPES-Na的區別及配制

關鍵詞：生物緩沖劑、HEPES、4-羥乙基哌嗪乙磺酸

  HEPES中文全稱 4-羥乙基哌嗪乙磺酸，CAS號為：7365-45-9，pH 緩沖范圍6.8 - 8.2 ，在25℃下，其pKa 值為7.5。HEPES-Na即N-(2-羥乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)鈉鹽，其CAS號為75277-39-3。HEPES和HEPES-Na都是非常重要的生物緩沖劑，在生物制藥、醫療診斷等領域有廣泛應用。

生物緩沖劑系列產品包裝

HEPES是一種兩性離子緩沖劑，應用于針對各種類型有機體的細胞培養基、蛋白質研究，還可用于生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里，因具有對細胞無毒性作用且能長時間控制恒定的pH范圍等優點，常備用作化妝品添加劑，起到活性劑、脫皮劑、促透劑等作用。

HEPES和HEPES-Na的區別：HEPES-Na又稱有機HEPES堿，與HEPES是共軛酸堿的關系，兩者本質上一樣，不過兩種物質溶解后的pH不同。

HEPES的制備方法：

關于HEPES緩沖溶液的配制,根據用途配制,一種是單純的HEPES＋NaOH,另一種是HEPES＋鹽。各種配制方法總結如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH（HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2）,然后用蒸餾水定容至500ml,于4攝氏度保存。

二、加少量鹽的HEPES Buffer配方（500ml）

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值,最后定容。

三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水,用0.5M NaOH調節至所需pH值,再用蒸餾水定容至100ml即可。

HEPES-Na的制備方法：

HEPES-Na可以通過4-羥乙基哌嗪與乙烯基磺酸鈉合成，也可以采用羥乙基磺酸、氫氧化鈉及4-羥乙基哌嗪高壓合成，目前符合生物緩沖劑要求的最廣泛的制備方法是將HEPES與NaOH反應生成HEPES-Na。具體制備步驟如下：

氮氣保護下將純度在90-99%之間的HEPES和NaOH固體或溶液進行反應0.2-1小時，反應溫度為20-100℃，反應完成后，將所得產物進行脫色、過濾、濃縮、除水、結晶、洗滌、干燥等操作，得到HEPES-Na。

這種制備方法工藝簡單，操作方便，且所得HEPES-Na產物收率高，產品純度高,可達到生物緩沖劑的純度要求。

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